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Spectrométrie de masse à très haute spécificité


Un équipement essentiel aux biotechnologies, désormais accessible à Genopole et au campus Paris-Saclay
Spectrométrie de masse à très haute spécificité - Plateforme génopolitaine Spectrométrie de masse à très haute spécificité - Plateforme génopolitaine

La plateforme de Spectrométrie de masse, labellisée par Genopole et opérée par le laboratoire LAMBE (Université d’Évry/CNRS/Cergy Paris Université) se dote d’un nouvel instrument offrant une capacité inégalée de séparation, caractérisation et quantification d’espèces moléculaires en mélanges complexes, grâce à la combinaison de la haute résolution et de la mobilité ionique cyclique.
Le « SELECT SERIES Cyclic IMS » a été financé par Genopole et l’Université d’Évry Paris-Saclay. Il a été installé en juin 2023 au sein du LAMBE qui apporte son expertise en chimie analytique, analyse structurale et biophysique. L’équipement mutualisé répond aux enjeux actuels de recherche et d’innovation biotech des laboratoires et entreprises du site. Il fait partie des trois seuls équipements de ce type disponibles en France !

L’essor des sciences post-génomiques et de leurs applications en santé, biomatériaux, énergie, agro-ressources, environnement fait naître des besoins croissants de caractérisation moléculaire à haute sensibilité et résolution, pour les laboratoires académiques comme pour les acteurs industriels.
Le système SELECT SERIES Cyclic IMS (cf. photo) répond à ces nouveaux enjeux de recherche et d’innovation. Il associe une technologie de rupture, la séparation moléculaire par mobilité ionique cyclique (Cyclic IM), à la détection et la caractérisation structurale de molécules en mélange par spectrométrie de masse (MS). Cet instrument de pointe particulièrement polyvalent, satisfera les demandes en R&D des laboratoires académiques et entreprises du biocluster évryen, ainsi que de l’Université Paris-Saclay. Il répond d’ores et déjà aux besoins de cinq laboratoires du campus génopolitain (SABNP, LBEPS, Génomique Métabolique, GenHotel, LAMBE).

Une palette technologique remarquablement complète sur la plateforme

Le LAMBE (Laboratoire Analyse, Modélisation, Matériaux pour la Biologie et l’Environnement) dispose pour cet instrument d’un large éventail de sources d’ionisation et de modes de fragmentation. Il est ainsi possible d’effectuer des analyses de liquides, ou de solides, grâce aux sources ESI, nanoESI, ASAP, APCI et DESI. La source DESI permet notamment l’analyse par imagerie moléculaire. Différents modes de fragmentations, c’est-à-dire diverses méthodes permettant de rompre des liaisons chimiques (par CID, ECD et SID), peuvent également diversifier l’information structurale obtenue. C’est le cas par exemple pour des protéines, peptides ou des oligo/polysaccharides qui contiendraient des groupements labiles, ou pour des édifices supramoléculaires de grande taille.

Citation« En termes de performance, grâce à un analyseur dit « à temps de vol » équipé de deux miroirs électrostatiques, le nouvel instrument peut atteindre une haute résolution en masse : par exemple > 100 000 (M/ΔM) pour l’ion [M+6H]6+ de l’insuline bovine » précise Régis Daniel, directeur du Lambe et responsable de la plateforme de Spectrométrie de masse. « Une haute résolution permet de séparer plus d’espèces moléculaires et facilite la détermination des structures » explique-t-il. « L’équipement fournit une précision de mesure de masse des composés < 0,5 ppm ce qui permet de déterminer les formules brutes de petites molécules avec plus de certitude« .

L’instrument de mobilité ionique cyclique (cIM) peut également recevoir en amont une dimension séparative supplémentaire grâce au couplage chromatographique selon deux configurations au choix : à débit analytique/micro LC-MS (LC-MS : chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse), « ACQUITY Premier », ou /nano LC-MS, « ACQUITY UPLC M-Class ».

Spectrométrie de masse couplée à la mobilité ionique cyclique : une technologie de rupture

Les récents développements technologiques ont conduit à la commercialisation de différents instruments avec des performances résolutives de plus en plus élevées. C’est dans ce contexte que la société Waters a introduit, en 2019, un spectromètre de masse de type QTOF comportant une nouvelle technologie de mobilité ionique haute résolution, le SELECT SERIES Cyclic IMS.
Cette technologie de rupture repose sur l’implémentation d’une cellule circulaire de mobilité ionique, qui conduit les ions à effectuer de multiples révolutions dans la cellule remplie d’un gaz. Ce qui est mesuré est alors la mobilité des ions dans le gaz, ce qui permet de les séparer en fonction de leurs structures tridimensionnelles.
Comme le nombre de révolutions dans la cellule de mobilité est théoriquement illimité, cela revient à allonger leur trajet également de manière illimitée pour atteindre une performance de séparation inégalée (ultra-haute résolution en mobilité jusqu’à environ 750, en comparaison de 250 max. jusqu’alors).

La séparation par mobilité ionique est couplée à la spectrométrie de masse au sein du même instrument SELECT SERIES Cyclic IMS, ce qui constitue une combinaison très puissante pour discriminer des composés différents mais de même masse ou des molécules de même composition mais d’organisation différente. Si on ajoute à ce dispositif la possibilité de coupler en amont une méthode de séparation supplémentaire par chromatographie, nous obtenons là un des plus puissants systèmes d’analyse actuels.

En conclusion


« Equipée de cet instrument technologique rare associé à l’expertise du laboratoire LAMBE, la plateforme de spectrométrie de masse ouvre aux chercheurs et entrepreneurs du biocluster génopolitain, et plus largement à la communauté scientifique du sud francilien, de larges perspectives comme l’étude de molécules biologiques pour une meilleure compréhension du vivant, la recherche de composés à visée thérapeutique ou environnementale, ou encore le développement industriel de biomatériaux innovants » souligne Julien Picot, responsable Plateformes à Genopole.

  • La spectrométrie de masse : Les progrès en chimie analytique au bénéfice de l’analyse des molécules biologiques

    La spectrométrie de masse (MS) s’est très largement imposée comme une technique de référence pour l’analyse moléculaire et notamment l’étude des molécules biologiques. Sa très grande polyvalence en fait aussi une méthode de caractérisation incontournable de petites molécules, et de polymères naturels (peptides, protéines, oligosaccharides, oligonucléotides) ou synthétiques.
    Par ailleurs, la possibilité de travailler en couplage avec la chromatographie, d’ioniser des molécules aux propriétés physicochimiques très différentes et d’effectuer de la fragmentation via diverses méthodes, la rend particulièrement adaptée pour identifier des protéines, séquencer des peptides (incluant ou non des modifications post-traductionnelles), et plus récemment des oligosaccharides.
    Cependant, utilisée seule, la spectrométrie de masse ne donne pas accès à des informations sur la structure tridimensionnelle des édifices moléculaires. Elle ne permet pas non plus d’identifier directement des composés isomères, de même composition atomique et donc de même masse moléculaire mais d’agencement structural différent.
    La caractérisation de mélanges complexes, ou de composés présentant une forte hétérogénéité de structures tels les polysaccharides, demeure un défi en chimie analytique. Le couplage de la spectrométrie de masse avec la mobilité des ions, permet de séparer les ions en phase gazeuse en fonction de leur taille et de leur forme, et ce en amont de la spectrométrie de masse. Cette approche très innovante contribue à repousser les limites de la spectrométrie de masse en (bio)chimie structurale.
    Lancé au milieu des années 2000, le premier dispositif commercial basé sur la mobilité ionique couplée à la spectrométrie de masse représentait ainsi une avancée importante. Cependant, la résolution séparative restait limitée par la longueur de la cellule de mobilité et ne permet pas de différencier des structures très proches, telles que des isomères de positions, ou des conformations moléculaires très proches.

  • L’offre Plateformes : une spécificité génopolitaine

    Genopole met à la disposition des laboratoires et entreprises du biocluster 25 plateformes technologiques mutualisées.
    L’objectif est de leur apporter des solutions concrètes dans l’ensemble des champs de recherche associés aux biotechnologies : biologie cellulaire et imagerie, biologie moléculaire, biologie structurale, bioproduction, ressources biologiques, exploration fonctionnelle, bio-informatique, robotisation et automatisation.

    Equipées de plus de 600 appareils mutualisés, dont des équipements de très haute technologie, les plateformes de Genopole sont un facteur clé de succès pour les laboratoires académiques qui participent à de nouvelles découvertes comme pour les entreprises biotech qui confirment le potentiel de leur innovation.

  • En savoir plus sur les recherches au LAMBE

    Le Laboratoire Analyse, Modélisation, Matériaux pour la Biologie et l’Environnement (LAMBE) développe des méthodes analytiques basées entre autres sur la spectrométrie de masse (MS).
    Ces développements visent à établir les relations entre la structure et les propriétés physico-chimiques des objets moléculaires étudiés (biomolécules, peptides, protéines, oligo/polysaccharides, polymères), à comprendre les mécanismes d’actions et analyser les interactions biomoléculaires.
    Le laboratoire cherche à :

    • lever des verrous analytiques (édifices moléculaires de grande taille et flexibles, résistants aux méthodes biostructu-rales usuelles, sulfo-protéomique, analyse des interactions, décodage structural et fonctionnel des glycosaminogly-canes),
    • obtenir des données structurales nouvelles par des couplages innovants (CE-MS, SPR-MS, IMS-MS), par de nouvelles méthodes d’ionisation (photo-ionisation, ASAP,…) et d’activation (IRMPD, ETD, CTD).

    Pour cela, le laboratoire dispose d’un parc de sept spectromètres de masse, et a accès aux Très Grands Equipements (TGE), tels que laser à électrons libres CLIO et le synchrotron SOLEIL.

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